Руководитель: М.Г. Акимов (ИБХ РАН). Куратор — О.В. Колясников
В то время, как дофамин — широко известная и изученная сигнальная молекула и ее биохимия хорошо изучена, ее производные остаются на втором плане для научного сообщества. В то же время последние исследования показывают, что роль одного из производных дофамина в организме, а именно NADA (N-арахидоноилдофамин), может быть даже значительней самого дофамина. Так, NADA является сигнальной молекулой для канабиоидных рецепторов и ваниллоидных рецепторах, обеспечивает морфогенетический эффект, участвует в локальном переносе катионов натрия, в синтезе бикарбанатов, а также имеет противоопухолевую активность. У NADA и других N-ацилированных производных дофамина с жирными кислотами имеется способность инициировать клеточную смерть в разных линиях раковых клеток при полу-летальных концентрациях в пределах 2-50μM. Наши же наблюдения показывают, что при меньших концентрациях клетки начинают меняться — в размерах, появляются отростки, — происходит дифференциация.
Настоящая работа заключается в изучении пределов допустимых концентраций дифференцирующей активности N-ацилированных дофаминов, ее зависимость от строения молекулы. В эксперименте участвовали 10 веществ, являющихся производными дофамина.
Работа была проведена в лаборатории Oxylipins Института Биоорганической Химии Шемякина-Овчинникова, РАН, Россия. Все вещества, участвующие в экспериментах, были синтезированы в лаборатории Oxylipins и хранятся лишь в виде растворов в этаноле или DMSO под атмосферой аргона при — 52°C. Культуры клеток (PC12) также были выращены в лаборатории.
Вся работа проходит под стерильным ламинаром, обрабатывающимся до работы УФ. Работа проводится в перчатках, до внесения в ламинар все поверхности вносимых объектов (руки, колбы, пипетки, и т.д.) обрабатываются этиловым спиртом. Чистые резервуары вносятся закрытыми, какими и хранятся в автоклаве, заранее стерилизуются. Питательная среда, добавляемая в лунки, заранее прогревается до температур, оптимальных для жизни клетки.
После действия веществ клетки фотографируют с увеличением в 20 раз. Оценивается количество умерших клеток, количество дифференцированных клеток, степень дифференциации. По фотографиям измеряется длина отростков, составляется статистика, показывающая среднее количество отростков и длину отростков на клетку в лунке, в которую добавлялась определенная концентрация.
После анализа данных выбираются новые концентрации на основании старых (в сторону, где результаты были лучше — большее количество клеток дифференцировало, меньшее погибло, отростки длиннее). Эксперименты повторяются до нахождения оптимальной концентрации для взятой плотности посева клеток.
Итог работы заключается в нахождении пределов оптимальных концентраций для всех 10 веществ, где происходила дифференциация в, предположительно, миобластому. Результат этой работы может быть использован в дальнейших исследованиях влияния N-ацилированных дофаминовна организмы.