Руководитель: Архипенко Юрий Владимирович; профессор, доктор биол. наук, заведующий лабораторией адаптационной медицины ФФМ МГУ
Координатор от СУНЦ МГУ: О.В.Колясников
Малоновый диальдегид (МДА) — один из продуктов свободнорадикального окисления липидов, накопление которого отражает степень оксидативного стресса в организме. Оценка этого показателя необходима для определения причин и механизмов развития того или иного патологического процесса и предложения способов лечения заболеваний.
Известным методом оценки уровня МДА является его реакция с тиобарбитуровой кислотой, в результате которой образуется розовый хромоген, носящий название «триметиновый комплекс». По значению оптической плотности этого хромогена, полученному на спектрофотометре, определяют концентрацию МДА. Наиболее доступным объектом такого исследования является кровь, а также её плазма или сыворотка. Однако наличие в крови многих компонентов, которые также вступают в реакцию с ТБК, осложняет определение истинной концентрации МДА.
Данная работа посвящена поиску метода корректного определения концентрации МДА в крови на основе спектрофотометрии продукта реакции с ТБК. В соответствии с этим необходимо выполнить следующие задачи:
- Сравнить спектры оптической плотности триметинового комплекса в образцах тканей и крови;
- Подобрать условия для производной спектрофотометрии триметинового комплекса при определении уровня МДА в крови.
Из экспериментов мы установили, что при наличии примесей в исследуемом образце затрудняется его спектрофотометрический анализ. Это служит причиной того, что метод определения концентрации МДА в крови, основанный на значениях спектров оптической плотности при 532 нм, не является корректным. Гораздо более достоверные сведения можно получить при использовании значений четвёртых производных тех же спектров при той же длине волны.
В соответствии с этим, в результате проведенной работы были сформулированы следующие выводы:
- Спектрофотометрия триметинового комплекса (продукта реакции МДА с ТБК) в образцах тканей и крови показала, что «чистота» спектров убывает в ряду: стандарт МДА > сердце > сыворотка крови > цельная кровь.
- Оптимальными условиями получения четвёртой производной спектров триметинового комплекса в крови являются: ширина щели монохроматора – 2 нм, скорость развёртки спектра – 50 нм/мин, Δλ = 17 нм.
- Четвертая производная спектров оптической плотности при анализе уровня МДА в крови или сыворотке позволяет получить корректные величины концентрации, в отличие от анализа с использованием самих спектров.