Научные руководители: Борисова Александра Викторовна, врач акушер-гинеколог, к.м.н.; Семина Екатерина Владимировна,с. н. с., к.б.н.
Цель: изучить способность стромальных клеток жировой ткани дифференцироваться в остеогенном и адипогенном направлении. Задачи: (1) выделить мезенхимальные стромальные клетки жировой ткани мыши (МСК-ЖТ); (2) культивировать МСК-ЖТ; (3) дифференцировать МСК-ЖТ с помощью коммерческих наборов; (4) Оценить дифференцировку МСК-ЖТ в адипогенном и остеогенном направлении с помощью окрашивания Oil Red O (липиды, жировые капли) и AlizarinS (отложение солей кальция).
Для выделения МСК-ЖТ из подкожной жировой ткани мыши самца C57/Black умерщвляли методом дислокации шейных позвонков. В стерильных условиях с области бедер вырезали жировую ткань и измельчали её до однородной массы, которую далее переносили в стерильную пробирку с равным объемом среды роста (DMEM). Пробирку инкубировали 1 ч при + 35°С. Далее ткань пропускали через нейлоновое сито (BD Falcon) с диаметром пор 40 мкм. После высаживания клеток в ч. Петри образцы помещали в клеточный инкубатор при +37°С и 5% CO2. Выделенные МСК-ЖТ культивировали до монослоя. Для дифференцировки клеток их однократно промывали раствором Версена и обрабатывали 0,25% трипсином (Gibco). Открепившиеся от подложки клетки разбавляли средой культивирования, пипетировали для дезагрегации и рассаживали в 12-ти луночный планшет (Corning Costar). Клетки культивировали в коммерческих средах, содержащих добавки для дифференцировки в адипогенном и остеогенном направлении (Thermo Scientific). Через 4 нед. для подтверждения дифференцировки проводили цитологическую окраску Alizarin Red S на отложения кальция и Oil Red O на жировые капли в клетках.
Результаты: в работе показано, что МСК-ЖТ являются клетками, способными дифференцироваться, как минимум, в двух направлениях – остеогеннном и адипогенном. Эти результаты свидетельствуют о том, что жировая ткань содержит пул недифференцированных клеток, способных к дифференцировке в зрелые клетки. Использование таких клеток является перспективным направлением в регенеративной медицине.
Список литературы:
(1) T. V. Sadler, Langman’ s Medical Embriologi, sixth edition;
(2) http://en.wikipedia.org/wiki/Shinya_Yamanaka;
(3) http://www.stvolkletki.ru/articles/1.html;
(4) http://xreferat.ru/55/8158-1-mehanizm-polucheniya-stvolovyh-kletok-problemy-i-perspektivy-ispol-zovaniya-ih-v-medicine.html;
(5) http://en.wikipedia.org/wiki/Stem_cell.