рук. А.А. Астахова, СУНЦ МГУ, НИИ ФХБ
Нейровоспаление сопровождает такие патологии центральной нервной системы, как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инсульты и другие. Воспалительный ответ сопровождается неспецифичным повреждением собственных структур организма и, следовательно, усугубляет нарушения в структурах ЦНС, имеющих ограниченный репаративный потенциал. Этот важный вопрос современной науки приводит к необходимости поиска механизмов регуляции воспалительного ответа в нервной ткани. Важными участниками воспалительного ответа нервной ткани являются астроглиальные клетки.
В данной работе было исследовано влияние дексаметазона (синтетического глюкокортикоида) на воспалительный ответ астроглии, вызванный добавлением липополисахарида или синтетического аналога двуцепочечной ДНК (соединения «поли ИЦ») к астроцитам однократно или в условиях повторных стимуляций.
Материалы и методы: культуры первичных астроглиальных клеток выделяли из головного мозга новорожденных крысят посредством перетирания мозговых структур через металлические сита с последующей инкубацией клеточного материала в среде DMEM с добавлением 10% телячьей сыворотки и антибиотиков. Культуры вели в течение двух недель, после чего пересаживали в культуральные планшеты и подвергали воздействию липополисахарида (100 нг/мл) или поли ИЦ (10 мкг/мл) в течение 4 часов. В некоторых экспериментах клетки обрабатывалилипополисахаридом и поли ИЦ дважды. При этом первая стимуляция длилась 48 часов, вторая стимуляция составляла 4 часа. Для первой стимуляции брали в 10 раз меньшую концентрациюпровоспалительных веществ. Для проверки воздействиядексаметазонаглюкокортикоид (100 нМ) добавляли за 1 час до единственной или второй стимуляции. После окончания эксперимента клетки растворяли в буфере RIPA. В полученных лизатах методом Брэдфордаизмерялиобщее содержание белка. Далее белки из полученных лизатовразделяли посредством электрофореза в полиакриламидном геле с додецилом сульфата натрия по Лэммли, переносили на нитроцеллюлозную бумагу и инкубировали с антителами против маркера воспалительного ответа циклооксигеназы 2 (СОХ-2). В данном эксперименте были сделаны две биологические повторности.
Полученные результаты показывают, что однократная или повторные стимуляции астроцитов липополисахаридом или поли ИЦ вызывают усиление экспрессии белка СОХ-2. При этом добавление дексаметазона предотвращает рост в экспрессии СОХ-2. Данные результаты показывают, что дексаметазон обладает противовоспалительными свойствами, которые проявляются в условиях воспаления, вызванного однократным или повторными воздействиями провоспалительных соединений.