Научный руководитель: Астахова Алина Анатольевна, к.б.н., м.н.с., НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского, МГУ

Обрящиков_1 Обрящиков_5 Обрящиков

Обрящиков презентация

Воспаление — ключевой механизм врожденного иммунитета, служащий для защиты организма от проникновения патогенов и нарушений гомеостаза. Регуляция воспаления является важной задачей современной медицины, в связи с этим актуально изучение молекулярных процессов, лежащих в основе иммунного ответа на уровне тканей или отдельных клеток. Одной из важных медицинских проблем являются заболевания связанные с ЦНС (центральной нервной системой), такие как болезнь Альцгеймера, Паркинсона и многие другие патологии. В последнее время стало понятно, что астроциты являются важными иммунокомпетентными клетками и играют ключевую роль в регуляции нейровоспаления[1]. Известно, что регуляция уровня экспрессии белков, участвующих в иммунном ответе, может осуществляться на различных уровнях. Транскрипционный уровень регуляции подразумевает контроль интенсивности транскрипции мРНК. Трансляционный уровень включает контроль интенсивности синтеза белка, кодируемого мРНК. Пострансляционный — регуляция количества и активности белка. Посттрансляционный контроль включает несколько различных механизмов, одним из них является регуляция интенсивности деградации белка. Стабилизация белков, вовлеченных в воспалительный ответ, ранее была показана для иммунных клеток [2], однако не исследована на для астроцитов. В связи с этим нашей целью данной работы было выяснить, какое действие оказывает провоспалительная стимуляция на деградацию белка COX-2 — важного участника воспалительного ответа [3], в астроцитах. Были поставлены следующие задачи:1. Оценить скорость деградации COX-2 в клетках, не подвергнутых воспалительной стимуляции, 2. Проанализировать изменение скорости деградации белка COX-2 под воздействием провоспалительной стимуляции клеток.В работе были использованы культуры первичных астроцитов, полученные из тканей мозга неонатальных крысят в соответствии с классическим протоколом [4]. Клетки культивировали 14 дней, до достижения монослоя, после чего рассаживали на планшеты и использовали в экспериментах. Для оценки скорости деградации белка использовали классический протокол с добавлением к клеткам ингибитора трансляции — циклогексимида (5 мкг/мл) на различные промежутки времени [5]. Для определения концентрации белка нами использован метод иммуноблотинга. В результате выполнения исследований получено, что скорость деградации COX-2  при обработке клеток LPS выше, чем в клетках, не подвергнутых провоспалительной стимуляции. Наши данные показывают, что посттрансляционный контроль скорости деградации белков вовлечен в регуляцию экспрессии медиаторов воспаления в астроцитах и может представлять важный механизм контроля интенсивности иммунного ответа в условиях нейровоспаления.

Список литературы:

  1. Sofroniew M. V., Vinters H.V., Astrocytes: biology and pathology // ActaNeuropathol. 2010. 119. P:7- 35
  2. Anderson P. Intrinsic mRNA stability helps compose the inflammatory symphony. Nat. Immunol. 2009.10. P:233-234.
  3. Rajakariar R., Yaqoob M.M., Gilroy D.W. COX-2 in inflammation and resolution. Mol. Interv. 2006. 6. P:187-207.
  4. Chistyakov DV, Aleshin S., Sergeeva MG, Reiser G. Regulation of peroxisome proliferator-activated receptor β/δ expression and activity levels by toll-like receptor agonists and MAP kinase inhibitors in rat astrocytes // Journal of Neurochemistry. том 130, № 4, с. 563-574
  5. Uri R. Mbonye, Chong Yuan, Clair E. Harris, et. al. Two Distinct Pathways for Cyclooxygenase-2 Protein Degradation // Journal of Biological Chemistry. January 18, 2008.